① 选靶点
CAST：活性口袋残基
(底物特异性/对映选择性)
B-FIT：高 B 因子柔性区
(热稳定性)
→
② 饱和突变
对选定残基
引入 19 种氨基酸
构建聚焦库
→
③ 高通量筛选
识别该位点
最优氨基酸
(Hit)
→
④ 锁定 + 迭代
固定本轮最优突变
进入下一位点
开始新一轮 ISM
→
⑤ 突破局部最优
多轮迭代探索
序列空间
获得累加协同效应
🎯 CAST (组合活性位点饱和测试)
围绕底物结合口袋选择 4–6 个邻近残基作为随机化靶点，专用于优化底物特异性与对映选择性。
🌡️ B-FIT (B 因子迭代测试)
依据 X 射线晶体学中的 B 因子（温度因子），挑选高柔性残基作为靶点，专用于提升酶的热稳定性。