突破同源性限制:合成洗牌 ADO
Assembly of Designed Oligonucleotides · 无需序列同源即可重组
ADO 合成洗牌流程
展示 ADO 通过设计含简并碱基的重叠寡核苷酸,将两条亲本基因组装为嵌合基因库,无需同源性且消除亲本自杂交。
ADO 合成洗牌三步流程
人工设计寡核苷酸 · 摆脱天然同源约束
① 亲本基因对齐
Gene A
Gene B
彩色点 = 不同氨基酸信息
② 设计重叠寡核苷酸
★ 含简并碱基
片段间保留重叠区
③ 聚合酶组装
嵌合基因库
ADO 的两大核心优势
1
无需同源性
亲本序列相似度低也能重组
2
消除亲本自杂交
人工设计避免模板自退火干扰
关键设计要点:
· 灰色保守区段可作为同源重组的连接区(Case I)
· 无同源侧翼时可通过单链连接酶组装(Case II)
→ 突破 DNA shuffling 必须 ≥70% 同源性的限制
ADO 本质
— 用
人工合成
的寡核苷酸替代 DNase 随机片段,把"重组"从依赖天然同源变成可编程设计。
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